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蛋白質(zhì)純化的主要方法

更新時(shí)間:2019-01-03點(diǎn)擊次數(shù):1183
  蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛,是一項(xiàng)重要的操作技術(shù)。 一個(gè)典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計(jì)的不同蛋白質(zhì),一些含量十分豐富,一些僅含有幾個(gè)拷貝。為了研究某一個(gè)蛋白質(zhì),必須先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來。
  蛋白質(zhì)純化主要方法
 ?。?)根據(jù)分子大小不同的分離方法:透析和超過濾(利用蛋白質(zhì)分子不能通過半透膜的性質(zhì));密度梯度離心(蛋白質(zhì)在介質(zhì)中離心時(shí)質(zhì)量和密度較大的顆粒沉降較快);凝膠過濾(一種柱層析)
 ?。?)利用溶解度差別分離:等電點(diǎn)沉淀法(由于蛋白質(zhì)分子在等電點(diǎn)時(shí)凈電荷為零,減少了分子間靜電斥力,因而容易聚集沉淀,此時(shí)溶解度?。?;鹽溶與鹽析(利用一定濃度鹽溶液增大或減小蛋白質(zhì)的溶解度)
 ?。?)根據(jù)電荷不同的分離方法,主要包括電泳和離子交換層析分離;
  (4)蛋白質(zhì)的選擇吸附分離(利用顆粒吸附力的強(qiáng)弱不同達(dá)到分離目的)
 ?。?)根據(jù)配體特性的分離——親和層析(利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異而非共價(jià)地結(jié)合這一生物性質(zhì))
  (6) 低溫有機(jī)溶劑沉淀法: 用與水可混溶的有機(jī)溶劑,甲醇,乙醇或丙酮,可使多數(shù)蛋白質(zhì)溶解度降低并析出,此法分辨力比鹽析高,但蛋白質(zhì)較易變性,應(yīng)在低溫下進(jìn)行。

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