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當前位置:首頁產品中心生化指標檢測試劑盒BC1065檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒
檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒

產品簡介

檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒
測定意義:
CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環(huán)個限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調控位點之一。
測定原理:
S催化乙酰CoA和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的DTNB轉變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

產品型號:BC1065
更新時間:2025-08-04
廠商性質:生產廠家
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檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體基質中,是三羧酸循環(huán)個限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調控位點之一。 CS 催化乙酰 CoA 和草酰乙酸產生檸檬酰輔酶 A,進一步水解產生檸檬酸;該反應促使無色的 DTNB 轉變成黃色的 TNB,在 412nm 處有特征吸光值。

檸檬酸合酶(CS)活性檢測試劑盒

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離: ① 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入 1mL 提取液和 10μL 試劑一,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。 ② 將勻漿液 600g,4℃離心 5min。 ③ 將上清液移另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。 ④ 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的 CS。 ⑤ 在沉淀中加入 200μL 試劑一和 2μL 試劑二,反復吹打充分混勻,用于 CS 測定。 ⑥ 檸檬酸合酶酶活即沉淀和上清液中的酶活之和。

 

1、組織中 CS 活力的計算: (1)按樣本蛋白濃度計算:單位的定義:37℃或 25℃下每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。 CS 上清(U/mg prot)=ΔA 上清÷ε÷d×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀(U/mg prot)=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)÷T =1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS(U/mg prot)=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。(2)按樣本鮮重計算:單位的定義:37℃或 25℃下每 g 組織在反應體系中每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。 CS 上清(U/g 鮮重)=ΔA 上清÷ε÷d×V 反總÷(W×V 樣本÷V 提取)÷T =1050×ΔA 上清÷W CS 沉淀(U/g 鮮重)=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反總÷(W×V 樣本÷V 沉淀)÷T =212×ΔA 沉淀÷W CS(U/g 鮮重)=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷W+212×ΔA 上清÷W。 2、細菌或培養(yǎng)細胞中 CS 活力的計算: (1)按樣本蛋白濃度計算:單位的定義:37℃或 25℃下每 mg 蛋白在反應體系中每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。 CS 上清(U/mg prot)=ΔA 上清÷ε÷d×V 反總÷(Cpr 上清×V 樣本)÷T=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清 CS 沉淀(U/mg prot)=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反總÷(Cpr 沉淀×V 樣本)÷T=1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀 CS(U/mg prot)=CS 上清+CS 沉淀=1050×ΔA 上清÷Cpr 上清+1050×ΔA 沉淀÷Cpr 沉淀。(2)按細菌或細胞密度計算:單位的定義:37℃或 25℃下每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘催化產生 1 nmol TNB 定義為一個酶活力單位。 CS 上清(U/104 cell)=ΔA 上清÷ε÷d×V 反總÷(500×V 樣本÷V 提取)÷T=2.1×ΔA 上清 CS 沉淀(U/104 cell)=ΔA 沉淀÷ε÷d×V 反總÷(500×V 樣本÷V 沉淀)÷T =0.42×ΔA 沉淀 CS(U/104 cell)=CS 上清+CS 沉淀=2.1×ΔA 上清+0.42×ΔA 沉淀。第 3 頁 共 3 頁 ε:TNB 的消光系數,13.6×10-3mL/(nmol·cm);V 反總:反應體系總體積,0.2 mL;d:比色皿光徑,1cm;V 樣本:加入的樣本體積,0.007mL;V 提?。禾崛∫后w積,1mL;V 沉淀:溶解沉淀的總體積,0.202mL;T:反應時間,2min;Cpr 上清:上清液的蛋白濃度,mg/mL;Cpr 沉淀:沉淀溶解后的蛋白濃度, mg/mL;W:樣本鮮重,g。

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